Схаанки БЛООМ Тецх Цо., Лтд. је један од најискуснијих произвођача и добављача 3кфлаг пептида цас 402750-12-3 у Кини. Добродошли у велепродају високог квалитета 3кфлаг пептида цас 402750-12-3 за продају овде из наше фабрике. Доступна је добра услуга и разумна цена.
3КСФЛАГ Пептидеје важна секвенца пептидног маркера која се широко користи у експресији протеина и процесима пречишћавања у биомедицинским истраживањима. Молекуларна формула Ц120Х169Н31О49С, ЦАС 402750-12-3. Састављен од 23 аминокиселине, његова секвенца садржи три поновљена Асп Тир Лис Ксаа Ксаа Асп мотива, који му дају специфичне структурне карактеристике.
Има добру растворљивост у специфичним растварачима. На пример, у ДМСО-у, његова растворљивост је висока, што га чини погодним за операције и експерименте у раствору. Поред тога, може постићи и добар ефекат растварања у води благим загревањем. Такође има нека посебна својства. На пример, има добру антигеност и реактивност и може се везати за специфична анти ФЛАГ антитела. Ова способност везивања га чини широко применљивим у експериментима као што је имунопреципитација. Компетитивним везивањем за Анти ФЛАГ антитела, протеин експримиран ФЛАГ фузијом који се везује за Анти ФЛАГ антитела може да се елуира током имунопреципитације, чиме се постиже локализација, детекција и пречишћавање циљног протеина.
|
Прилагођени чепови и чепови за боце:
|
|
|
Хемијска формула |
C120H169N31O49S |
|
Тачна маса |
2860 |
|
Молецулар Веигхт |
2862 |
|
m/z |
2861 (100.0%), 2860 (77.0%), 2862 (32.9%), 2862 (31.4%), 2863 (22.1%), 2862 (11.5%), 2863 (10.1%), 2861 (8.8%), 2864 (8.1%), 2862 (7.8%), 2863 (7.4%), 2863 (5.3%), 2863 (4.5%), 2862 (3.5%), 2864 (3.3%), 2864 (3.2%), 2865 (2.2%), 2865 (2.1%), 2864 (2.1%), 2862 (1.9%), 2862 (1.9%), 2861 (1.5%), 2864 (1.5%), 2861 (1.4%), 2864 (1.4%), 2863 (1.2%), 2864 (1.2%) |
|
Елементална анализа |
C, 50.36; H, 5.95; N, 15.17; O, 27.39; S, 1.12 |
3КСФЛАГ Пептидеје ознака која се користи у истраживању протеина, а састоји се од 8 аминокиселина са секвенцом ДИКДХДГДИКДХДИДИКДДДДК. Његова главна функција је да служи као маркер за експресију и пречишћавање протеина, пружајући погодно и ефикасно средство у истраживању.
1. Пречишћавање афинитета:
Може се користити као ознака за пречишћавање протеина, а захваљујући свом високом афинитету са анти ФЛАГ антителима, циљни протеин се може лако пречистити. Обично се циљни протеин котрансфектује у ћелије експресионим вектором који садржи 3Кс ФЛАГ ПЕПТИД, а затим се пречишћава афинитетом коришћењем анти ФЛАГ антитела да би се брзо и ефикасно добио циљни протеин високе чистоће.
2. Имунолошко тестирање:
Због своје високе имуногености, може се користити за откривање експресије и локализације протеина. Коришћењем специфичних анти ФЛАГ антитела, експерименталне технике као што су имуноблотирање и имунофлуоресцентно бојење могу се извести како би се брзо и прецизно открио ниво експресије и дистрибуција циљних протеина.
3. Филтрирање клонова:
Такође се може користити за погодност скрининга протеинских клонова. У процесу изградње вектора експресије протеина, повезивање генске секвенце циљног протеина са секвенцом 3КСФЛАГ може олакшати скрининг позитивних клонова са циљним протеином кроз имунолошку детекцију и друге методе, чиме се убрзава процес истраживања функције протеина.
4. Имунопреципитација:
Такође се може користити за експерименте имунопреципитације протеина. Везивањем протеина који садрже 3Кс ФЛАГ ПЕПТИДЕ ознаке за анти ФЛАГ антитела, а затим коришћењем адсорпционих материјала као што су протеин А/Г агароза или магнетне перле, циљни протеин и његови партнери у интеракцији могу се селективно исталожити из ћелијских екстраката како би се проучавала мрежа интеракције протеина.
5. Скрининг на лекове:
Такође се може користити у истраживању скрининга лекова. Комбиновањем ознаке 3Кс ФЛАГ ПЕПТИДЕ са протеином од интереса, може се постићи висок-скрининг протеина. Овај метод скрининга се може користити за откривање нових циљева лека, процену интеракција протеина лекова и тако даље.
6. Истраживање функције протеина:
Увођење ознака не утиче значајно на природну структуру и функцију протеина, па се стога може користити за проучавање биолошких функција, субћелијске локализације, интеракција и сигналне трансдукције протеина. Увођењем ознаке 3Кс ФЛАГ ПЕПТИДЕ, -може се спровести дубинско истраживање биолошких карактеристика протеина, што помаже да се открију њихови механизми деловања у ћелијској биологији и физиологији.
3КСФЛАГ Пептидеје пептид који садржи 8 аминокиселина, са секвенцом ДИКДХДГДИКДХДИДИКДДДДК. Обично се користи као протеинска ознака за погодно пречишћавање, детекцију и истраживање циљних протеина. У процесу биосинтезе, може се припремити путем хемијске синтезе или методама генетског инжењеринга. Следе детаљни кораци метода генетског инжењеринга:
1. Дизајнирајте и синтетизујте гене:
Прво, потребно је дизајнирати вештачки ген који садржи секвенцу 3Кс ФЛАГ ПЕПТИДЕ. Овај ген треба да садржи секвенцу 3Кс ФЛАГ ПЕПТИДЕ, као и одговарајуће промотере, терминаторе и маркере за селекцију (као што су гени толеранције на антибиотике). Дизајн гена треба да узме у обзир карактеристике и потребе експресије циљног домаћина.
2. Клонирање гена:
Затим, дизајнирани вештачки гени ће бити клонирани у одговарајуће векторе експресије. Обично коришћени вектори укључују плазмиде, вирусне векторе, итд. Процес клонирања обично укључује следеће кораке:
-ПЦР амплификација: Коришћење ланчане реакције полимеразе (ПЦР) за амплификацију секвенце циљног гена из шаблонске ДНК.
-Дигестија и повезивање: ПЦР производи се дигестирају експресионим векторима помоћу рестрикцијских ендонуклеаза, а затим их повезују помоћу ДНК лигаза.
-Трансформација: Трансформисање повезаног експресионог вектора у бактеријске домаћине као што је Есцхерицхиа цоли да би се формирао рекомбинантни плазмид.
-Идентификација: Рекомбинантни плазмиди су идентификовани путем ПЦР-а, варења ензима, секвенцирања ДНК и других метода како би се потврдило да је циљни ген успешно клониран у вектор.
3. Циљни протеин експресије:
Трансфекција конструисаног експресионог вектора у циљне ћелије домаћина, као што су ћелије сисара, ћелије квасца, ћелије инсеката, итд. У ћелијама, експресиони вектор се транскрибује у иРНК, а затим преводи у протеине. 3Кс ФЛАГ ПЕПТИД ће бити експримиран заједно са циљним протеином као протеинска ознака.
4. Екстракција протеина:
Сакупите трансфектоване ћелије и извршите фрагментацију ћелија, центрифугирање и друге третмане да бисте добили укупни екстракт протеина.
5. Пречишћени протеин:
Коришћењем техника пречишћавања афинитета као што су имунопреципитација и афинитетна хроматографија, циљни протеини који садрже 3Кс ФЛАГ ПЕПТИДЕ ознаке су пречишћени из укупног екстракта. Ово обично укључује везивање анти ФЛАГ антитела за протеине који садрже 3Кс ФЛАГ ПЕПТИД, а затим њихово одвајање помоћу колона за афинитетну хроматографију или магнетних перли.
6. Идентификујте протеине:
Пречишћени протеин је идентификован и квантификован помоћу СДС-ПАГЕ гел електрофорезе, имуноблотинга, масене спектрометрије и других технологија да би се обезбедила његова чистоћа и интегритет.
Нежељене реакције
У биомедицинским истраживањима и експериментима везаним за протеине, пептиди за означавање играју кључну улогу. Они могу помоћи истраживачима у пречишћавању, откривању и лоцирању циљних протеина, у великој мери промовишући развој науке о протеинима.3КСФЛАГ Пептидеје уобичајен и широко коришћен пептид са ознаком састављен од три поновљене секвенце ФЛАГ ознаке. Ознаку ФЛАГ су првобитно дизајнирали Хопп ет ал. 1988. године, а касније се развила у варијанте као што је 3КСФЛАГ, које имају висок афинитет и специфичност и могу да се вежу за специфична антитела, олакшавајући накнадну изолацију и идентификацију. Иако је 3КСФЛАГ донео многе погодности у експериментима, као и други биолошки агенси, он такође може изазвати неке нежељене реакције.
Нежељене реакције повезане са имунитетом
Имуногеност
Имуногеност се односи на способност супстанце да стимулише имуни систем тела да произведе имуни одговор. 3КСФЛАГ, као сегмент егзогеног пептида, имуни систем тела може да препозна као компоненту која није „самостална“, чиме се покреће имуни одговор. Иако је секвенца 3КСФЛАГ релативно кратка, у неким случајевима може и даље активирати Б ћелије и Т ћелије, што доводи до производње антитела. Ова антитела не само да се везују за слободни 3КСФЛАГ, већ могу да препознају и везују се за фузионе протеине који експримирају ознаку 3КСФЛАГ, утичући на нормалну функцију и дистрибуцију фузионог протеина.
Алергијске реакције
Алергијска реакција је абнормални имуни одговор узрокован преосетљивошћу имуног система на одређене алергене. Појединци могу искусити алергијске реакције када користе 3КСФЛАГ за експериментисање или лечење. Озбиљност симптома алергијских реакција је различита. Благи случајеви могу се манифестовати локалним симптомима као што су свраб, осип и еритем, док тежи случајеви могу изазвати системске алергијске реакције као што је анафилактички шок, који се карактерише оштрим падом крвног притиска, отежаним дисањем и губитком свести, што представља озбиљну претњу по животну безбедност.
Алергијске реакције
Механизам алергијских реакција је углавном повезан са ИгЕ антителима у имунолошком систему. Када тело први пут дође у контакт са 3КСФЛАГ, имуни систем га препознаје као алерген и стимулише Б ћелије да производе специфична ИгЕ антитела. Ова ИгЕ антитела се везују за површину мастоцита и еозинофила. Када тело поново дође у контакт са 3КСФЛАГ, оно се везује за ИгЕ антитела на површини ћелије, покрећући мастоците и еозинофиле да ослобађају биоактивне медијаторе као што су хистамин и леукотриени, што доводи до појаве алергијских симптома.
Ризик од аутоимуних болести
Дуготрајна или поновљена изложеност 3КСФЛАГ-у може повећати ризик од развоја аутоимуних болести. Аутоимуне болести се односе на врсту болести у којој имуни систем тела грешком напада сопствена ткива и органе, што доводи до оштећења ткива и функционалног оштећења. 3КСФЛАГ може да индукује имуни систем да производи унакрсно реактивна антитела и Т ћелије путем механизма молекуларне симулације, где је његова аминокиселинска секвенца слична секвенци одређених протеина у телу.
Ове имуне ћелије и антитела не само да нападају страни 3КСФЛАГ, већ и ненамерно оштећују нормална ткива тела, што доводи до аутоимуних болести. На пример, одређене аутоимуне болести као што су системски еритематозни лупус и реуматоидни артритис могу бити повезане са аутоимуним реакцијама изазваним егзогеним супстанцама. Иако тренутно нема јасних доказа који би сугерисали да 3КСФЛАГ директно изазива аутоимуне болести, овај потенцијални ризик се не може занемарити.
Утицај на ћелијску функцију
У неким експерименталним студијама откривено је да високе концентрације 3КСФЛАГ могу имати токсичне ефекте на ћелије. Манифестације цитотоксичности укључују промене у ћелијској морфологији, нарушавање интегритета ћелијске мембране, промене у активности интрацелуларних ензима и инхибицију пролиферације ћелије. Његов механизам деловања може бити повезан са интеракцијом између 3КСФЛАГ и ћелијске мембране. Због јаког негативног наелектрисања 3КСФЛАГ,
може да се веже за позитивно наелектрисане компоненте на ћелијској мембрани путем електростатичких интеракција, мењајући пропустљивост и флуидност ћелијске мембране, што доводи до цурења интрацелуларних супстанци или уласка штетних супстанци споља, чиме утиче на нормалне физиолошке функције ћелије. Поред тога, 3КСФЛАГ такође може ући у унутрашњост ћелија, ометати сигналне путеве, синтезу протеина и друге процесе, додатно погоршавајући оштећење ћелија.
Ефекти на путеве ћелијске сигнализације
3КСФЛАГ може ометати интрацелуларне сигналне путеве и утицати на нормалне физиолошке активности ћелија. Ћелијски сигнални пут је колективни термин за низ молекуларних догађаја у којима ћелије реагују на спољашње стимулусе, регулишући важне процесе као што су раст ћелија, диференцијација и апоптоза. 3КСФЛАГ може ометати нормалан пренос сигналних путева интеракцијом са кључним молекулима у сигналном путу, мењајући нивое сигналне активности или експресије молекула.
На пример, може се везати за рецепторе на површини ћелије, компетитивно инхибирајући везивање природних лиганада за рецепторе и блокирајући пренос сигнала; Алтернативно, може ући у ћелију и везати се за протеине за трансдукцију сигнала, утичући на фосфорилацију протеина, дефосфорилацију и друге процесе модификације, ометајући пренос и појачавање сигнала. Ова интерференција са путевима ћелијске сигнализације може довести до ћелијске дисфункције, утичући на процесе као што су ћелијска пролиферација, диференцијација и апоптоза, што заузврат може имати штетне ефекте на нормалан развој и функцију ткива и органа.
Ефекти на ћелијски метаболизам
Ћелијски метаболизам је општи термин за низ хемијских реакција које се дешавају унутар ћелија, обезбеђујући енергију и материјалну основу за ћелијске животне активности. 3КСФЛАГ може да утиче на ћелијске метаболичке процесе, омета производњу ћелијске енергије и синтезу супстанци. На пример, може утицати на функцију митохондрија, који су главна места за аеробно дисање и производњу енергије у ћелијама. 3КСФЛАГ може да промени пермеабилност и потенцијал митохондријалне мембране интеракцијом са протеинима или липидима на мембрани, утичући на функцију митохондријалног респираторног ланца и синтезу АТП,
што доводи до недовољног снабдевања ћелијске енергије. Поред тога,3КСФЛАГ Пептидетакође може ометати интрацелуларне процесе као што су метаболизам глукозе и метаболизам липида, утичући на равнотежу синтезе и разградње супстанци у ћелијама и негативно утичући на нормалне физиолошке функције ћелија
Често постављана питања
Шта је 3Кс ЗАСТАВА?
+
-
3Кс ФЛАГ пептид је синтетички пептид од 23 аминокиселинског остатка. Асп-Тир-Лис-Ксаа-Ксаа-Асп мотив се понавља три пута у пептиду. Осам аминокиселина на Ц-терминусу чине класичну ФЛАГ секвенцу (Асп-Тир-Лис-Асп-Асп-Асп-Асп-Лис).
Која је разлика између ознаке флаг-и 3кфлаг?
+
-
Флаг{0}}ознака је једна секвенца од 8 аминокиселина која се обично користи у имунопреципитацији, вестерн блот-у и имунофлуоресценцији. Насупрот томе, ознака 3к Флаг- садржи 22 аминокиселине, што јој даје већи афинитет за анти-Флаг антитела, и чини је посебно погодном за токове пречишћавања протеина.
Како растворити 3Кс ЗАСТАВУ?
+
-
Да бисте припремили основни раствор, растворите у ТБС (50 мМ Трис{1}}ХЦл, пХ 7,4, са 150 мМ НаЦл) у концентрацији од 5 мг/мЛ. Аликвот и чувати на -20 степени. Поновљено замрзавање и одмрзавање се не препоручује.
Popularne oznake: 3кфлаг пептиде цас 402750-12-3, добављачи, произвођачи, фабрика, велепродаја, куповина, цена, расути, на продају